洗涤在过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA操作中，洗涤是zui主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎。
一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂试剂的准备按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定（如间接法ELISA）需用稀释的血清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育（incubation），有人称之为孵育，在ELISA中似不恰当。ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有zui贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育。温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃（冰箱温度）等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELISA方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时，产物的生成可达。为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为*，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中，以形成zui多的沉淀。但因所需时间太长，在ELISA中一般不予采用。
2-氨基芴;2-芴胺 153-78-6 ： 2-AMinofluorene;2-FluorenylaMine 英文名称：
2-氨基异丁酸;DL-2-氨基异丁酸;2-氨基异酪酸;DL-2-甲基;DL-2-氨基-2-甲基丙酸 62-57-7 ： 2-AMinoisobutyric acid;DL-2-AMinoisobutanoic acid;DL-2-AMinoisobutyric acid;DL-2-Methylalanine;DL-2-AMino-2-Methyl propanoic acid 英文名称：
Hydroxyisopropylbenzene;β-Methylphenethyl alcohol;β-HydroxycuMene;Hydrotropic alcohol 英文名称：
2-苯基-2-丁烯醛 ≥97% 4411-89-6 ： 2-PHENYL-2-BUTENAL 英文名称：
2-苯基-5(4-联苯基)-1.3.4-恶二唑 15082-28-7 ： 2-(4-tert-Butylphenyl)-5-(4-biphenyl)-1,3,4-oxadiazole 英文名称：
2-苯基乙胺;1-氨基-2-苯基乙烷;β-氨基乙苯 64-04-0 ： 2-PhenylethylaMine;BenzeneethanaMine 英文名称：
2-苯基乙基丙酸酯 120-45-6 ： 1-Phenylethyl propionate 英文名称：
2-苯甲酰苯甲酸 85-52-9 ： 2-Benzoylbenzoic acid 英文名称：
上一篇 采购抗Ⅲ抗体Elisa试剂盒时各决定因素如下 下一篇 抗Ⅲ抗体Elisa试剂盒免疫酶技术的优势