实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠肝星形分离自肝脏组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用；肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里大的器官，位于机体中的腹部位置，在右侧横隔膜之下，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方，胃的上方。肝脏是机体消化系统中大的消化腺，为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构：肝脏位于右上腹，隐藏在右侧膈下和肋骨深面，大部分肝为肋弓所复盖，仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁，肝上面则与膈及腹前壁相接。肝星形细胞（HSC）又名肝贮脂细胞、贮存细胞、窦周细胞、Ito细胞等，是肝脏细胞外基质的主要来源。HSC在激活后可进一步转化为肌成纤维细胞样细胞，各种可导致肝纤维化的因素均将HSC作为终靶细胞。正常情况下，HSC处于静止状态，当肝脏发生炎症反应或受到机械刺激等损伤时，HSC的表型由静止型转变为激活型，激活的HSC可通过增生和分泌细胞外基质参与肝纤维化的形成及肝内结构的重建，此过程也是肝纤维化的中心环节。肝星形细胞分布于肝脏的Disse间隙内，是合成、分泌细胞外基质的主要来源，在肝纤维化的发生中处于重要地位。肝星形细胞是肝脏的间充质细胞，约占肝脏细胞总数的8%-13%。作为肝脏合成细胞外基质的主要细胞群，肝星形细胞不仅能分泌蛋白多糖、糖蛋白等细胞外基质成分，合成一定量的胶原酶以维持正常的基底膜结构，还能通过其突起的收缩参与肝窦的微循环调节。此外，肝星形细胞能通过合成肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子、表皮生长因子等促进肝细胞增殖和肝再生。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠肝星形采用混合酶灌流消化、低速离心、密度梯度离心制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠肝星状经α-SMA、Desmin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

猪血管生成素2试剂盒   猪血管生成素2试剂盒   规格型号：96T/48T   猪血管生成素2试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：猪血管生成素2试剂盒、猪血管生成素2eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

猪血管生成素1试剂盒   猪血管生成素1试剂盒   规格型号：96T/48T   猪血管生成素1试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：猪血管生成素1试剂盒、猪血管生成素1eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

猪血管内皮细胞粘附分子1试剂盒   猪血管内皮细胞粘附分子1试剂盒   规格型号：96T/48T   猪血管内皮细胞粘附分子1试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：猪血管内皮细胞粘附分子1试剂盒、猪血管内皮细胞粘附分子1eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

猪血管内皮生长因子试剂盒   猪血管内皮生长因子试剂盒   规格型号：96T/48T   猪血管内皮生长因子试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：猪血管内皮生长因子试剂盒、猪血管内皮生长因子eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

猪纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA 试剂盒

Human maix metalloproteinase 2/ gelatinase A (MMP-2/Gelatinase A) ELISA Kit 人基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)试剂盒

Rabbitadramycin,ADRELISAKit 兔阿(ADR)试剂盒 进口分装

CLIAKitforai-CMVIgM(Humanai-cytomegalovirusIgMaibody)ELISAKit人抗巨细胞病毒抗体IgM

血液α-L-岩藻糖苷酶(AFU)荧光定量试剂盒20次

PorcineHeatShockProtein40,HSP-40ELISAKit猪热休克蛋白40(HSP-40)试剂盒

FCGR4重组小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His 标签) Protein

Cdc34 peptide 细胞周期调控因子34抗原 0.5mgCdc34 peptide 细胞周期调控因子34抗原

ADK重组人 ADK 蛋白 (His & GST 标签) Protein

BCL6 Protein Human 重组人 BCL6 / B-cell CLL lymphoma 6 蛋白 (aa 1-150, His & Trx 标签)

SELL Protein Mouse 重组小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 (His & Fc 标签)

Cdc34 peptide 细胞周期调控因子34抗原 0.5mgCdc34 peptide 细胞周期调控因子34抗原

BCL6 Protein Human 重组人 BCL6 / B-cell CLL lymphoma 6 蛋白 (aa 1-150, His & Trx 标签)

FCGR4重组小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His 标签) Protein

SELL Protein Mouse 重组小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 (His & Fc 标签)

ADK重组人 ADK 蛋白 (His & GST 标签) Protein

小鼠肝星状细胞大鼠胱天蛋白酶8(Casp-8)试剂盒 ，英文名： Casp-8 ELISA Kit

Rabbit major histocompatibility complex class II (MHC II /RLA II) ELISA Kit 兔主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ/RLAⅡ)试剂盒

人疱疹病毒6型(HHV-6)核酸试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMMP-4ELISAKit大鼠基质金属蛋白酶4

体液基质金属蛋白酶(MMP-13)活性荧光定量试剂盒20次(10样本)

ELISAKitDHT犬双氢睾同