实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠肺大动脉内皮分离自肺大动脉组织；肺大动脉亦称肺动脉干。在呼吸空气的脊椎动物中，把静脉血由心脏导向肺脏的动脉。肺大动脉起于右心室，在主动脉之前向左上后方斜行，在主动脉弓下方分为左、右肺动脉，经肺门入肺。肺动脉干位于心包内，为一粗短的动脉干。起自右心室，在升主动脉前方向左后上方斜行，至主动脉弓下方分为左、右肺动脉。左肺动脉较短，在左主支气管前方横行，分二支进入左肺上、下叶。右肺动脉较长而粗，经升主动脉和上腔静脉后方向右横行，至右肺门处分为三支进入右肺上、中、下叶。细胞呈单层多角形铺路石状分布；该细胞在维持血管内外的动态平衡、合成和分泌细胞因子和介质、维持凝血和纤溶的动态平衡中起重要作用。肺大动脉内皮细胞呈单层多角形铺路石状分布，该细胞在维持血管内外的动态平衡、合成和分泌细胞因子和介质、维持凝血和纤溶的动态平衡中起重要作用。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠肺大动脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠肺大动脉内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

小鼠神经生长因子 (mouse NGF)   作用：   ELISA   规格：   96T*2   美国 Chemicon

小鼠骨桥蛋白 ( mouse Osteopoin)   作用：   ELISA   规格：   96T   德国 IBL

小鼠血小板衍化生长因子 (mouse PDGF-AA)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D

小鼠血小板衍化生长因子 -B(mouse PDGF-AB)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D

小鼠鼠痘病毒抗体(MPV-Ab)试剂盒 96T/48T

Human measles virus IgM (MV IgM) ELISA Kit 人麻疹病毒IgM(MV IgM)试剂盒

HumaalinELISAKit 人踝蛋白(talin)试剂盒 96T/48T 进口分装

Duckmajorhistocompatibilitycomplex,MHC试剂盒鸭主要组织相容性复合体(MHC)试剂盒规格：96T/48T

藻类细胞甲磺酸乙脂突变诱导试剂盒10次

MouseCyclosporineA,CsAELISAKit小鼠A(CsA)试剂盒规格：96T/48T

HA重组甲型流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

PP-2A (protein phosphatase 2A 0.5mgPP-2A (protein phosphatase 2A) 蛋白质0酸酶-2A(抗原)

USP7重组人 USP7 / HAUSP 蛋白 (aa 208-560, His & GST 标签) Protein

CLIC1 Protein Human 重组人 CLIC1 蛋白

NBL1 Protein Human 重组人 NBL1 / DAND1 / DAN 蛋白 (Fc 标签)

PP-2A (protein phosphatase 2A 0.5mgPP-2A (protein phosphatase 2A) 蛋白质0酸酶-2A(抗原)

CLIC1 Protein Human 重组人 CLIC1 蛋白

HA重组甲型流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

NBL1 Protein Human 重组人 NBL1 / DAND1 / DAN 蛋白 (Fc 标签)

USP7重组人 USP7 / HAUSP 蛋白 (aa 208-560, His & GST 标签) Protein

小鼠肺大动脉内皮细胞大鼠合酶运输因子(NOSIN)试剂盒 ，英文名： NOSIN ELISA Kit

Mouse urokinase type plasminogen activator receptor (PLAUR/uPAR) ELISA Kit 小鼠型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)试剂盒

MouseAngiopoietin1,ANG-1ELISAKit 小鼠血管生成素1(ANG-1)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanCoronavirusesIgGELISAkit人流行性乙型脑抗体IgG

细胞BTK激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitBMP-2大鼠骨成型蛋白2