细胞简介：

小鼠肠神经嵴干分离肠组织；神经嵴干细胞（neural crest stem cells，NCSC），即外周神经系统干细胞，起源于胚胎期的神经管背侧，与中枢神经系统干细胞在形态学上有着显著不同，NCSC可表达低亲和力神经营养因子受体p75NTR而不能分化出少突胶质细胞，而中枢神经系统干细胞与之恰好相反。NCSC可在不同部位分化出多种组织，如神经元、神经胶质、黑色素细胞、内分泌细胞、平滑肌、骨骼肌及骨等，其中可特异性分化出肠神经系统中神经元和神经胶质的NCSC，被称为肠神经嵴干细胞（gut neural crest stem cells，GNCSC）。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠肠神经嵴干采用-胶原酶联合消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠肠神经嵴干经Nestin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 悬浮

细胞形态 球形

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠3-羟基-3-甲基戊二酰合酶(HMGCS)检测试剂盒 ，英文名： HMGCS ELISA Kit

Mouse somal cell derived factor 1A (SDF-1a/CXCL12) ELISA Kit 小鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)检测试剂盒

MouseColonCancerAigen,CCAELISAKit 小鼠结肠癌抗原(CCA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumaeceptorforadvancedglycationendproducts,RAGE/AGERELISAKit人晚期糖基化终末产物受体

通用型猪沙门氏菌(SwineSalmonella)试剂盒20次

ELISAKitvisfatin大鼠内脂素/内脏脂肪素

IL34重组小鼠 IL-34 蛋白 Protein

Ceruloplasmin peptide 铜蓝蛋白抗原 0.5mgCeruloplasmin peptide 铜蓝蛋白抗原

ISG15重组人 ISG15 / G1P2 蛋白 (mature form) Protein

CROT Protein Human 重组人 CROT 蛋白 (474 Leu/Val, His 标签)

FGFR4 Protein Mouse 重组小鼠 FGFR4 / CD334 蛋白

Ceruloplasmin peptide 铜蓝蛋白抗原 0.5mgCeruloplasmin peptide 铜蓝蛋白抗原

CROT Protein Human 重组人 CROT 蛋白 (474 Leu/Val, His 标签)

IL34重组小鼠 IL-34 蛋白 Protein

FGFR4 Protein Mouse 重组小鼠 FGFR4 / CD334 蛋白

ISG15重组人 ISG15 / G1P2 蛋白 (mature form) Protein

小鼠羟脯酸(Hyp)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human talin (Gelson) ELISA Kit 人凝胶原蛋白(gelson)检测试剂盒

Humanlowdensitylipoprotein,LDLELISAKit 人低密度脂蛋白(LDL)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

GuineaPigplasmin-aiplasmincomplex,PAP检测试剂盒豚鼠纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)检测试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧(ROS)高质绿色荧光测定试剂盒20次

MouseBonemorphogeneticproteieceptorⅡ,BMPR-ⅡELISAKit小鼠骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPR-Ⅱ)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠肠神经嵴干细胞小鼠硫氧还蛋白还原酶(xR)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠硫氧化还原蛋白(x)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠流行性出血热抗体（EHF-Ab）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠0脂酰肌醇抗体IgG/IgM(PIAb-IgG/IgM)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。