实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

兔气管平滑肌分离自气管组织；气管（Trachea），呼吸器官的一部分；为后壁略平的圆筒型管状。上端平第六颈椎下缘，与环状软骨相连；向下至第四、五胸椎体（相当胸骨角平面）交界处，分左、右主支气管，分叉处称为气管杈。气管主要由14-16个半环状软骨构成，有弹性，软骨为“C"字形的软骨环，缺口向后，各软骨环以韧带连接起来，环后方缺口处由平滑肌和致密结缔组织连接，保持了持续张开状态。管腔衬以粘膜，表面覆盖纤毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空气中的灰尘颗粒，纤毛不断向咽部摆动将粘液与灰尘排出，以净化吸入的气体。气管平滑肌是气管的重要结构组成之一，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用；能够保持气道张力，维持气道管状形态，从而有利于气体流通，保持肺部通气。气管平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。气管平滑肌细胞的异常是呼吸道疾病的重要病理特征之一，其增生、肥大是气道重塑的关键。

方法简介：

公司实验室分离的兔气管平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合组织贴块法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的兔气管平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

生长分化因子-3   英文名称：   growth differeiation factor 3   规格：      英文缩写：   GDF-3

胶质纤维酸性蛋白   英文名称：   glial fibrillary acidic protein   规格：      英文缩写：   GFAP

生长激素释放多肽Ghrelin   英文名称：   peptide hormone Ghrelin   规格：      英文缩写：   Ghrelin

胰高血糖素   英文名称：   Glucagon   规格：      英文缩写：   GC

豚鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat signal ansduction molecule 7 (Smad7) ELISA Kit 大鼠信号转导分子7(Smad7)试剂盒

HumancytosolicphospholipaseA2,cPLA2ELISAKit 人胞浆型0脂酶A2(cPLA2)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humancrystalproteinsβ,Cryβ试剂盒人晶体蛋白β(Cryβ)试剂盒规格：96T/48T

组织EBV(EPSTEIN-BARR)病毒定性试剂盒20次

HumanProstaglandinDSyhase,PGDSELISAKit人前列腺素D合成酶(PGDS)试剂盒规格：96T/48T

HA重组甲型流感 H1N1 (A/New York/1/1918) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

PACAP(6-38 Peptide 0.5mgPACAP(6-38 Peptide) 腺苷酸环化酶激活肽6-38

LILRB3重组人 LILRB3 / LIR3 / ILT5 / CD85a 蛋白 Protein

IL12A & IL27B Protein Human 重组人 IL12A & IL27B Heterodimer 蛋白

ACE2 Protein Human 重组人 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白 (Fc 标签)

PACAP(6-38 Peptide 0.5mgPACAP(6-38 Peptide) 腺苷酸环化酶激活肽6-38

IL12A & IL27B Protein Human 重组人 IL12A & IL27B Heterodimer 蛋白

HA重组甲型流感 H1N1 (A/New York/1/1918) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

ACE2 Protein Human 重组人 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白 (Fc 标签)

LILRB3重组人 LILRB3 / LIR3 / ILT5 / CD85a 蛋白 Protein

兔气管平滑肌细胞大鼠抗存活素抗体(Ai-Surv)试剂盒 ，英文名： Ai-Surv ELISA Kit

Monkey adrenomedullin (ADM) ELISA Kit肾上腺髓质素(ADM)试剂盒

RatCompleme4,C4ELISAKit 大鼠补体蛋白4(C4)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFree-T3(HumanFreei-iodothyronineIndes)ELISAKit人游离三甲状腺原

细胞活化10(FACTORXa)活性荧光定量试剂盒20次

Ratpigmeepithelium-derivedfactor,PEDFELISAKit大鼠色素上皮衍生因子(PEDF)试剂盒规格：96T/48T