① 组织块培养法

组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

② 消化培养法

③ 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

④器官培养

器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。

产品名称：人胃癌组织成纤维细胞

英文名称：详见说明书

组织来源：胃癌组织

产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

人胃癌组织源成纤维分离自患有胃癌病人的胃癌组织；胃癌（gastric carcinoma）是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，在我国各种恶性肿瘤中发病率居位，胃癌可发生于胃的任何部位，其中半数以上发生于胃窦部，胃大弯、胃小弯及前后壁均可受累，绝大多数胃癌属于腺癌。在胃癌侵袭和转移的过程中，涉及诸多复杂的过程，如细胞外基质的硬化和降解、新生血管的形成等，而这些过程会直接或间接的引起肿瘤微环境（Tumor mircoenvironment）的改变。肿瘤微环境即肿瘤细胞生存的外部环境，由不同种类的非肿瘤性的细胞与细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）构成，包括纤维细胞，免疫细胞，内皮细胞，间充质干细胞等，肿瘤细胞通过调控这些间质细胞，创造出有利于自身侵袭转移的条件，从而使得肿瘤得到进展。越来越多的证据表明，肿瘤微环境的改变在肿瘤进展中扮演着重要的角色。在肿瘤微环境中，研究多也是主要的间质细胞是肿瘤相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts, CAFs）。CAFs 主要由肿瘤周边的正常成纤维细胞和成纤维细胞样细胞演化而来。胃癌组织源成纤维细胞多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。刚分离的胃癌组织源成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

公司实验室分离的人胃癌组织成纤维采用混合胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人胃癌组织成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

取材→分离→培养和维持

1、取材

人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鲜和保鲜

② 应严格无菌

③ 防止机械损伤

④ 去除无用组织和避免干燥

⑤ 应注意组织类型、分化程度、年龄等

⑥ 作好记录

2、分离

人或动物体内(或胚胎组织)由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来。

(1)悬浮细胞的分离方法

组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。

(2)实体组织材料的分离方法

对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。

① 机械分散法

特点:简便、快速,但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织。

② 消化分离法

组织消化法是把组织剪切成较小团块(或糊状)，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。

大鼠克拉拉细胞蛋白16(CC16)检测试剂盒 ，英文名： CC16 ELISA Kit

Mouse apolipoprotein A1 (apo-A1) ELISA Kit 小鼠载脂蛋白A1(apo-A1)检测试剂盒

RatAzidothymidine,AZTELISAKit 大鼠(AZT)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFSP(HumanFibroblastsurfaceprotein)ELISAKit人纤维母细胞表面抗原

细胞还原型(GSH)浓度比色法定量检测试剂盒50次

Ratplatelet-derivedgrowthfactor,PDGFELISAKit大鼠血小板衍生生长因子(PDGF)检测试剂盒规格：96T/48T

EFNA5重组食蟹猴 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 标签) Protein

MMP-20(matrix metalloproteinase 20 0.5mgMMP-20(matrix metalloproteinase 20) 基质金属蛋白酶20抗原

MAP2K2重组人 MEK2 / MAP2K2 / MKK2 蛋白 (GST 标签) Protein

GUCA1A Protein Human 重组人 GCAP1 / GUCA1A 蛋白

CSF1R Protein Mouse 重组小鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His & Fc 标签)

MMP-20(matrix metalloproteinase 20 0.5mgMMP-20(matrix metalloproteinase 20) 基质金属蛋白酶20抗原

GUCA1A Protein Human 重组人 GCAP1 / GUCA1A 蛋白

EFNA5重组食蟹猴 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 标签) Protein

CSF1R Protein Mouse 重组小鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His & Fc 标签)

MAP2K2重组人 MEK2 / MAP2K2 / MKK2 蛋白 (GST 标签) Protein

小鼠αS转移酶(α-GST)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat dihydrotestosterone (DHT) ELISA Kit 大鼠双氢睾酮(DHT)检测试剂盒

HumanPregnancySpecificβ1Glycoprotein,SP1/PSβ1-GELISAKit 人特异性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humancholinephosphoglyceride,PC/CPG检测试剂盒人0酸甘油酯(PC/CPG)检测试剂盒规格：96T/48T

总胆汁酸(TBA)定量检测试剂盒20次

HumanscavengerreceptorB,SRBELISAKit人清道夫受体B(SRB/CD36)检测试剂盒规格：96T/48T

人胃癌组织成纤维细胞兔(rabbit NO)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

兔合酶(rabbit NOS)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

兔神经元烯醇化酶(rabbit NSE)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

T-25培养瓶充满培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。本公司的所有产品仅用于科学研究或者工业科研等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用