细胞简介：

人脐带血造血干分离自脐带血；脐带血是胎儿娩出、脐带结扎并离断后残留在胎盘和脐带中的血液。近十几年的研究发现，脐带血中含有可以重建造血和免疫系统的造血干细胞，可用于造血干细胞移植，因此，脐带血已成为造血干细胞的重要来源。脐带血中含有大量的干细胞，干细胞是生命的种子，它会分化成机体的各种细胞，结出各种不同的果实——血液细胞、神经细胞、骨骼细胞等。干细胞是具有自我更新、高度增殖和多项分化潜能的细胞群体；这些细胞可以通过分裂维持自身细胞的特性和数量，又可进一步分化为各种组织细胞，从而在组织修复等方面发挥积极作用。造血干细胞具有自我更新能力并能分化为各种血细胞的前提细胞，终生成各种血细胞成分，包括红细胞，白细胞和血小板。造血干细胞需要根据机体的生理需求适时的补充血液系统各个成熟细胞组分。同时在损伤、炎症等应激状态下，造血干细胞也扮演着调节和维持体内血液系统各个细胞组分的生理平衡的角色。临床治疗中，造血干细胞移植广泛应用于血液系统疾病以及自身免疫疾病，在其它实体瘤的治疗中，比如淋巴瘤，生殖细胞瘤，乳腺癌，小细胞肺癌，主要应用于常规治疗失败或复发难治以及具有不良预后因素的患者。造血干细胞以不对称有丝分裂方式进行增殖，一个干细胞分裂产生两个子细胞，一个分化为造血祖细胞，另一个则保持干细胞特征。造血干细胞在不断体外培养产生大量造血祖细胞同时，保持自己既不增殖也不分化。体外培养微环境合适，造血干细胞可持续维持培养 60 天左右。 造血干细胞体外增殖培养需要基质细胞滋养（滋养层细胞），缺少滋养层细胞不增殖，无法长期培养，本产品为收集培养好的造血干悬浮细胞灌装发货，不包含滋养层，因此收货后建议尽快实验。

方法简介：

实验室分离的人脐带血造血干采用采集脐带血、密度梯度离心、差速贴壁法结合培养基筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的人脐带血造血干经CD34免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：含FBS、SCF、IL-3、TPO、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：悬浮

细胞形态：圆形

传代特性：不建议传代

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

人脐带血造血干体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

人载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA 试剂盒

Human tumor associated aigen (TAA) ELISA Kit 人肿瘤相关抗原(TAA)检测试剂盒

HumanCaspase3,Casp-3ELISAKit 人胱天蛋白酶3(Casp-3)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humaninsulin-likegrowthfactors1,IGF-1检测试剂盒人胰岛素样生长因子1(IGF-1)检测试剂盒规格：96T/48T

组织基质金属蛋白酶(MMP-9)明胶法比色定量检测试剂盒20次

HumanLebtospiraIgMELISAKit人钩端IgM(Lebtospira)检测试剂盒规格：96T/48T

HA重组甲型流感 H3N2 (A/Perth/16/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

PR (Progestogerone receptor 0.5mgPR (Progestogerone receptor) 孕激素受体(抗原)

ABL1重组人 ABL1 / JTK7 / p150 蛋白 (GST 标签) Protein

INS Protein Human 重组人 Insulin / INS 蛋白

DLL4 Protein Human 重组人 DLL4 蛋白 (Fc 标签)

PR (Progestogerone receptor 0.5mgPR (Progestogerone receptor) 孕激素受体(抗原)

INS Protein Human 重组人 Insulin / INS 蛋白

HA重组甲型流感 H3N2 (A/Perth/16/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

DLL4 Protein Human 重组人 DLL4 蛋白 (Fc 标签)

ABL1重组人 ABL1 / JTK7 / p150 蛋白 (GST 标签) Protein

豚鼠白介素6(IL-6)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat angiotensinogen (aGT) ELISA Kit 大鼠血管紧张素原(aGT)检测试剂盒

HumanAi-proteinase3aibodyIgG,PR3Ab-IgGELISAKit 人抗蛋白酶3抗体IgG(PR3Ab-IgG)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumancyclophilinA,CyPA检测试剂盒人嗜环蛋白/亲环素A(CyPA)检测试剂盒规格：96T/48T

组织GSK3激酶总活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanPolyADPribosepolymerase,PARPELISAKit人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)检测试剂盒规格：96T/48T

人脐带血造血干细胞人整合素连接激酶1(ILK-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人细胞色素P450c21B/21-羟化酶(CYP21B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人细胞色素P450c21A/21-羟化酶(CYP21A)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。