细胞简介：

人破骨分离自骨组织和骨髓；破骨细胞是骨组织中的多核巨细胞，位于骨组织表面的浅凹处。目前一般认为破骨细胞是分离自骨骼外的造血系统，其前体可能属于造血干细胞的前单核细胞。破骨细胞的主要功能是维持骨吸收和骨形成的相对平衡，若失去这种平衡则发生病理性变化。因此多数学者从破骨细胞着手研究破骨细胞的结构、功能探讨骨吸收，形成相互平衡的机制。但破骨细胞是一种终末分化细胞，属于不增殖细胞群，不能增殖和传代，只能进行原代培养且存活时间较短。

方法简介：

公司实验室分离的人破骨采用机械分离法/密度梯度离心法和骨髓单核细胞诱导法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人破骨经TRAP染色检测，纯度可达30%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 多核巨细胞

传代特性 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠0酸肌醇3激酶试剂盒   小鼠0酸肌醇3激酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠0酸肌醇3激酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠0酸肌醇3激酶试剂盒、小鼠0酸肌醇3激酶eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠0酸化细胞外信号调节激酶试剂盒   小鼠0酸化细胞外信号调节激酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠0酸化细胞外信号调节激酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠0酸化细胞外信号调节激酶试剂盒、小鼠0酸化细胞外信号调节激酶eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠细胞蛋白试剂盒   小鼠细胞蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠细胞蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠细胞蛋白试剂盒、小鼠细胞蛋白eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠可溶性试剂盒   小鼠可溶性试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠可溶性试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠可溶性试剂盒、小鼠可溶性eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠前列腺素F(PGF)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human thrombin aithrombin complex (TAT) ELISA Kit 人抗复合物(TAT)试剂盒

HumanArginase,ArgELISAKit 人精酶(Arg)试剂盒 96T/48T 进口分装

GuineapigTumornecrosisfactorα,TNF-α试剂盒豚鼠坏死因子α(TNF-α)试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母细胞染色质免疫沉淀分析(CHIP)试剂盒10次

MouseBonemorphogeneticprotein4,BMP-4ELISAKit小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)试剂盒规格：96T/48T

IL4R重组大鼠 IL4R / Il4ra 蛋白 (Fc 标签) Protein

DNA-PKcs peptide DNA依赖蛋白激酶催化亚基多肽抗原 0.5mgDNA-PKcs peptide DNA依赖蛋白激酶催化亚基多肽抗原

USP5重组人 USP5 / ISOT 蛋白 Protein

CSAG1 Protein Human 重组人 CSAGE / CSAG1 蛋白 (Fc 标签)

TNFRSF10B Protein Mouse 重组小鼠 TRAIL R2 / CD262 / TNFRSF10B 蛋白

DNA-PKcs peptide DNA依赖蛋白激酶催化亚基多肽抗原 0.5mgDNA-PKcs peptide DNA依赖蛋白激酶催化亚基多肽抗原

CSAG1 Protein Human 重组人 CSAGE / CSAG1 蛋白 (Fc 标签)

IL4R重组大鼠 IL4R / Il4ra 蛋白 (Fc 标签) Protein

TNFRSF10B Protein Mouse 重组小鼠 TRAIL R2 / CD262 / TNFRSF10B 蛋白

USP5重组人 USP5 / ISOT 蛋白 Protein

人破骨细胞大鼠细胞间粘附分子2(ICAM2)试剂盒 ，英文名： ICAM2 ELISA Kit

Mouse somatostatin (SS) ELISA Kit 小鼠(SS)试剂盒

MouseCyclicguanosinemonophosphate,cGMPELISAKit 小鼠环0酸鸟苷(cGMP)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHSP-40(HumanHeatShockProtein40)ELISAKit人热休克蛋白40

细胞MAPKAPKINASE3激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-17大鼠白介素17

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。