细胞简介：

人脑静脉血管平滑肌分离自脑静脉组织；与脑动脉相比，脑静脉管壁较薄。与身体其他部位的静脉不同，脑静脉管壁中没有静脉瓣，静脉血的回流依赖高位的势能。脑静脉血的回流路径可以归纳为：大部脑静脉血经脑深部静脉和脑血窦流入颈内静脉；小部脑静脉血经眼部翼状静脉丛，进入静脉导血管再到头皮，后流入椎管中的椎旁静脉系统。脑静脉系统有大量交通枝静脉丛，即使两侧颈内静脉都被阻塞，大脑静脉血仍可经椎静脉和颈外静脉系统完成其回流。脑静脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。

方法简介：

公司实验室分离的人脑静脉平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人脑静脉血管平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠成纤维细胞生长因子11(FGF11)检测试剂盒 ，英文名： FGF11 ELISA Kit

Human XC chemokine receptor 1 (XCR1) ELISA Kit 人XC趋化因子受体1(XCR1)检测试剂盒

RatCarboxyterminalpropeptideoftypeⅠprocollagen,PⅠCPELISAKit 大鼠Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforCr(MouseCrosslaps)ELISAKit小鼠骨胶原交联

细胞血管紧张素Ⅰ转化酶2(ACE2)活性荧光共振能量转移法(FRET)定量检测试剂盒20次

RatCystatinC,Cys-CELISAKit大鼠半胱蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)检测试剂盒规格：96T/48T

CD59重组食蟹猴 CD59 / CD59A / MAC-IP 蛋白 Protein

KT3 tag KT3 tag标签抗原 0.5mgKT3 tag KT3 tag标签抗原

CPLX2重组人 Complexin-2 / CPLX2 蛋白 Protein

IL1R1 Protein Human 重组人 IL1R1 / CD121a 蛋白

IgG2a Protein Mouse 重组小鼠 IgG2a-Fc 蛋白

KT3 tag KT3 tag标签抗原 0.5mgKT3 tag KT3 tag标签抗原

IL1R1 Protein Human 重组人 IL1R1 / CD121a 蛋白

CD59重组食蟹猴 CD59 / CD59A / MAC-IP 蛋白 Protein

IgG2a Protein Mouse 重组小鼠 IgG2a-Fc 蛋白

CPLX2重组人 Complexin-2 / CPLX2 蛋白 Protein

豚鼠巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)检测试剂盒 ，英文名： M-CSF ELISA Kit

Human apoptosis protease activating factor 1 (ICAD) ELISA Kit 人凋亡蛋白酶激活因子1(ICAD)检测试剂盒

Monkeymonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor,MCP1/MCAFELISAkit单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBFP(Humanbasicfetoprotein,BFP)ELISAKit人碱性胎儿蛋白

细菌氢ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒20次

rabbitIerleukin8,IL-8ELISAKit兔子白介素8(IL-8/CXCL8)检测试剂盒规格：96T/48T

人脑静脉血管平滑肌细胞乳酸（LD）（血清、组织）检测   Lactic acid (LD) (whole blood) detection

乳酸（LD）（全血）检测   Lactate dehydrogenase (LDH) detection

乳酸脱氢酶（LDH）检测   ATP enzyme (sodium and potassium, calcium and  ATP enzyme) detection

ATP酶（、钙ATP酶）检测   Any one, sodium potassium calcium and  ATP enzyme detection

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。