实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠阴道壁成纤维分离自阴道组织；阴道位于膀胱、尿道和直肠之间，是一个富有弹性的管状器官。它在人类生殖过程中具有多种生理功能，是连接子宫与外阴的通道，是排出月经血、娩出婴儿的必经之路，也是一个重要的性交器官。阴道壁按组织学由外到内分三层，即黏膜层、肌层和外膜。1）黏膜层由上皮和固有膜组成。上皮较厚，为复层鳞状上皮，从基底层到表层由基底层、旁基底层、中间层和表层组成。没有角化层。阴道粘膜的基底层呈细波纹状起伏。2）肌层由平滑肌组织构成，肌束排列不规则，纵行和环形互相交错。肌束间有较多的结缔组织和弹性纤维。阴道外口有环形的横纹肌称括约肌。3）外膜层为纤维膜，由结缔组织构成，内含丰富的弹性纤维、静脉丛、淋巴管和神经。大鼠阴道壁成纤维细胞主要分离自外膜层，成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠阴道壁成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠阴道壁成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3-5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)检测试剂盒 ，英文名： LDL-IC ELISA Kit

Pig hea muscle oponin I (cTn- I) ELISA Kit 猪心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)检测试剂盒

钩端核酸检测试剂盒(荧光PCR法) 48T

CLIAKitforLR/Ob-R(HumanLeptieceptor)ELISAKIT人苗条素受体

通用封阻缓冲液100毫升

ELISAKitAT-Ⅲ鸡抗Ⅲ抗体

MPL重组大鼠 c-MPL / CD110 / TPOR 蛋白 Protein

E.coli DH-5 Alpha(E.coli DH-5 Alpha Protein 0.5mgE.coli DH-5 Alpha(E.coli DH-5 Alpha Protein) DH 5 alpha 大肠杆菌菌体蛋白

LTF重组人 Lactotransferrin / LTF 蛋白 Protein

CD8B Protein Human 重组人 CD8B / P37 / LEU2 蛋白 (Fc 标签)

IFNAR1 Protein Mouse 重组小鼠 IFNAR1 / IFNAR 蛋白

E.coli DH-5 Alpha(E.coli DH-5 Alpha Protein 0.5mgE.coli DH-5 Alpha(E.coli DH-5 Alpha Protein) DH 5 alpha 大肠杆菌菌体蛋白

CD8B Protein Human 重组人 CD8B / P37 / LEU2 蛋白 (Fc 标签)

MPL重组大鼠 c-MPL / CD110 / TPOR 蛋白 Protein

IFNAR1 Protein Mouse 重组小鼠 IFNAR1 / IFNAR 蛋白

LTF重组人 Lactotransferrin / LTF 蛋白 Protein

小鼠纤维蛋白肽B(FPB)检测试剂盒 96T/48T

Human leucine aminopepridase (LAP) ELISA Kit 人亮氨酰氨基肽酶(LAP)检测试剂盒

Humanlipoteichoicacids,LTAELISAKit 人脂0壁酸(LTA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenfactorB,BF检测试剂盒鸡B因子(BF)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞CASPASE-4蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MousehepatitisBviruseaibody,HBeAbELISAKit小鼠乙型肝e抗体(HBeAb)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠阴道壁成纤维细胞小鼠血管内皮细胞生长因子B(mouse VEGF-B)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠血管内皮细胞生长因子C(mouse VEGF-C)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠血管内皮细胞生长因子D(mouse VEGF-D)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠血管内皮细胞生长因子受体1(mouse VEGF-R1)   作用：   ELISA   规格：      进口分装