实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠肠黏膜上皮分离自肠道组织；肠道指的是从胃幽门至门的消化管。肠是消化管中最长的一段，也是功能最重要的一段。哺乳动物的肠包括小肠、大肠和直肠3大段。大量的消化作用和几乎全部消化产物的吸收都是在小肠内进行的，大肠主要浓缩食物残渣，形成粪便，再通过直肠经门排出体外。肠道堪称身体最劳累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足够的养分，其实它的功能还远不止此——它还是机体内最大的微生态系统。肠黏膜上皮细胞是机体内外环境的重要屏障，持续暴露于大量抗原中，也是机体面对病原微生物的道防线。因此，肠黏膜上皮细胞除有吸收、分泌和转运等重要生理功能之外，在黏膜先天性和获得性免疫防御机制中也起着重要作用。肠黏膜上皮细胞作为首先接触抗原的细胞，在黏膜免疫反应的起始阶段发挥关键作用，它决定黏膜免疫反应的发生、性质和强度。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠肠黏膜上皮采用先机械分离法、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠肠黏膜上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠胃动蛋白1(GKN1)检测试剂盒 ，英文名： GKN1 ELISA Kit

Mouse aquaporin 4 (AQP-4) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白4(AQP-4)检测试剂盒

Mousemonocytechemotacticprotein4,MCP-4ELISAkit 小鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforhs-CRP(HumanhighsensitivityC-ReactiveProtein)ELISAKit人超敏C反应蛋白

细胞NAD依赖性甘油-3-0酸脱氢酶(NAD-Glyceraldehyde-3-PhosphateDehydrogenase;NAD-GAPDH)活性光谱法定量检测试剂盒20次

ELISAKitBTC大鼠β细胞素

SEMA4D重组大鼠 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 蛋白 Protein

FOXJ1/HFH-4 peptide 插头蛋白J1抗原 0.5mgFOXJ1/HFH-4 peptide 插头蛋白J1抗原

SULT1A1重组人 SULT1A1 / STP1 蛋白 Protein

GPX7 Protein Human 重组人 GPX7 / Glutathione Peroxidase 7 蛋白 (Fc 标签)

EPHB4 Protein Mouse 重组小鼠 EphB4 / HTK 蛋白

FOXJ1/HFH-4 peptide 插头蛋白J1抗原 0.5mgFOXJ1/HFH-4 peptide 插头蛋白J1抗原

GPX7 Protein Human 重组人 GPX7 / Glutathione Peroxidase 7 蛋白 (Fc 标签)

SEMA4D重组大鼠 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 蛋白 Protein

EPHB4 Protein Mouse 重组小鼠 EphB4 / HTK 蛋白

SULT1A1重组人 SULT1A1 / STP1 蛋白 Protein

小鼠β甘露糖苷酶(β Manase)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human vitamin C (VC) ELISA Kit 人C(VC)检测试剂盒

Humancalmodulin,CAMELISAKit 人钙调素(CAM)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanchemerin检测试剂盒人chemerin检测试剂盒规格：96T/48T

转基因玉米NK603品系试剂盒20次

Humanserineprotease，PRSSELISAKit人丝蛋白酶(PRSS)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠肠黏膜上皮细胞兔主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ/RLAⅡ)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔主要组织相容性复合体Ⅰ类(MHCⅠ/RLAⅠ)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔坏死因子α（TNF-α）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔脂蛋白α(Lp-α)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装