细胞简介：

大鼠肠道干分离自肠道组织；肠道指的是从胃幽门至门的消化管。肠是消化管中最长的一段，也是功能最重要的一段。哺乳动物的肠包括小肠、大肠和直肠3大段。大量的消化作用和几乎全部消化产物的吸收都是在小肠内进行的，大肠主要浓缩食物残渣，形成粪便，再通过直肠经门排出体外。肠道堪称身体最劳累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足够的养分，其实它的功能还远不止此——它还是机体内最大的微生态系统。肠道干细胞（ISC）也称肠道上皮干细胞，主要位于肠黏膜隐窝内，其与肠道黏膜上皮的更新和修复密切相关。正常情况下，位于隐窝基底部的肠道干细胞不断向隐窝顶部（肠腔方向）迁移，整个迁移过程大约3-5d，在迁移过程中肠道干细胞分化形成不同的肠黏膜细胞。当受到外界生理或病理信号作用时，ISC可持续增殖、分化为成熟肠上皮细胞，如肠型细胞、杯状细胞、内分泌细胞和潘氏细胞等，从而维持肠道黏膜结构和功能的稳定性。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠肠道干采用-胶原酶联合消化后，用肠道干细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠肠道干经MSI-1免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 悬浮

细胞形态 球形

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠S100B蛋白(S100B)检测试剂盒 ，英文名： S100B ELISA Kit

Mouse azidothymidine (AZT) ELISA Kit 小鼠(AZT)检测试剂盒

ELISA 小鼠活化调节趋化因子(mouse TARC)  进口分装

CLIAKitforIFN-Beta/IFNB(MouseIerferonBeta)ELISAKit小鼠β干扰素

通用型(avianinfluenza;AI)试剂盒20次

ELISAKitVC大鼠C

TNFRSF1A重组小鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 Protein

Bcl-2(抗原 0.5mgBcl-2(抗原) Bcl-2(多肽抗原)

CCL22重组人 CCL22 / MDC 蛋白 Protein

GPNMB Protein Human 重组人 GPNMB / Osteoactivin 蛋白

FLT1 Protein Rat 重组大鼠 VEGFR1 / FLT-1 蛋白

Bcl-2(抗原 0.5mgBcl-2(抗原) Bcl-2(多肽抗原)

GPNMB Protein Human 重组人 GPNMB / Osteoactivin 蛋白

TNFRSF1A重组小鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 Protein

FLT1 Protein Rat 重组大鼠 VEGFR1 / FLT-1 蛋白

CCL22重组人 CCL22 / MDC 蛋白 Protein

小鼠β内啡肽受体(β-EPR)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human vitamin B6 (VB6) ELISA Kit 人B6(VB6)检测试剂盒

HumanCollagenaseTypeIIELISAKit 人胶原酶II(CollagenaseII)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanc-fos检测试剂盒人c-fos检测试剂盒规格：96T/48T

转基因玉米MON863品系基因定量检测试剂盒20次

Humanserine/threonineproteinkinase,STKELISAKit人丝/苏蛋酸酶(STK)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠肠道干细胞兔子D二聚体(D2D)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔子C反应蛋白(CRP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔子B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔子Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和尊龙凯时联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和尊龙凯时联系，告知细胞的具体情况，以便尊龙凯时的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。