测定步骤:
1.加样
1.除包被外都需45度加样
2.加样体积要准确
3.管底加样,不能加在管壁上
4.加样时不能产生气泡
2.温浴
1.加标本后和加结合物后,应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。
2.各ELISA板不应叠在一起。
3.为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。
4.加入底物后,反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃,ELISA板可避光放在实验台上,以便 不时观察,待对照管显色适当时,即可终止酶反应。
3.洗涤
1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却 是决定实验成败的关键。
2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。
4.读板
1.阴性对照颜色极浅,在定性测定中一般 可采用目视比色。
2.如用酶标仪测定结果,准确性决定于ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。
实验结果判断我有妙招:
1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。
4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:
① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。
② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。
③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。
④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。
⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。
ARMCX3ARM重复X连锁蛋白ARMCX3抗体
ARMCX1ARM重复X连锁蛋白ARMCX1抗体
ARMCX2ARM重复X连锁蛋白ARMCX2抗体
Apg10自噬相关蛋白10抗体
Aminoacylase 1氨基酰化酶1抗体
Adipose Triglyceride Lipase脂肪甘油三酯脂酶抗体
phospho-AMPK alpha-1 (Thr172)磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体
Amphiregulin双调蛋白(结肠直肠细胞源性生长因子)抗体
phospho-AQP2(Ser264)磷酸化水通道蛋白2抗体
AXL粘附相关激酶抗体
phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703)磷酸化粘附相关激酶抗体
phospho-AKT1 + AKT2 + AKT3 (Thr308+Thr309+Thr305)磷酸化蛋白激酶B抗体
phospho-AQP2(Ser269)磷酸化水通道蛋白2抗体
phospho-Amyloid Precursor Protein (Thr743)磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体
phospho-AKT1(Ser129)磷酸化蛋白激酶B抗体
phospho-Amyloid Precursor Protein (Ser198)磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体
phospho-ATF4 (Ser245)磷酸化活化转录因子4抗体
phospho-Androgen Receptor (Ser213)磷酸化雄激素受体抗体