免疫测定自20世纪70年代初创立以来,由于其具有特异、灵敏、简便、快速的特点,现已在生物医学研究领域及临床疾病的诊疗中得到了广泛的应用,相对于放射免疫测定(RIA)技术来说,EIA还有试剂半衰期长,对环境污染小,试验废物易于处理等优点,但测定敏感性一般较RIA低,于是,为提高EIA的测定敏感性,出现了众多的EIA测定放大系统,使EIA的测定敏感性赶上甚或超过了RIA。
建立正IA测定放大系统的一般原则
EIA本身是以酶[辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)等]作标记物的,因此,EIA的测定放大始终是围绕着标记酶来作文章的,不外乎三种可能的方式:①增加标记酶的量;②非显色底物的应用;③附加一个受标记酶催化的反应系统。
一、增加标记酶的量
通过/亲合素—酶或酶/抗酶复合物的间接方法,可以增加ELISA测定中zui后所测定的标记酶的量。这种方法虽在一定程度上由于标记酶的聚集增加了EIA的测定敏感性,但同时有增加非特异的背景显色的可能。
二、非显色底物的应用
从酶的反应底物着手,使用具有高测定敏感性的非显色底物如荧光素或发光物,从而提高EIA的测定敏感性,这种方法的优点是不需额外的步骤及试剂制备,缺点是需要特殊的测定仪器。
三、附加一个受标记酶催化的反应系统
原始标记酶催化附加一个反应系统,如酶底物反应循环或酶级联反应,从而达到反应放大的目的。这种由数个催化反应的耦联而构建的放大系统,是酶放大的根本之所在,敏感性的提高来源于真正的信号放大,而不是简单地将一个分子转变为更多的易于测定的分子。一个适用的酶放大系统的选择除了要考虑生化因素外,zui为重要的是酶及其底物的稳定性,并要易于获得,因其对试验的准确性和重复性有较大的影响。
培养基 进口、国产 Glycine Medium 用于弯曲杆菌耐受性试验(GB标准) 250
快速硫化氢试验琼脂 进口、国产 H2S Test Medium 用于弯曲杆菌的硫化氢试验(GB标准) 250
DNA酶甲基绿琼脂基础 进口、国产 Dnase Agar Base with Methyl Green 用于弯曲杆菌的DNA酶水解试验(GB标准) 100
马尿酸钠培养基 进口、国产 用于弯曲杆菌的马尿酸钠水解试验(GB标准) 100
快速硫化氢(H2S)试验琼脂 进口、国产 用于弯曲杆菌的硫化氢试验(GB标准) 250
波尔顿选择性增菌肉汤 进口、国产 Bolton Selective Enrichment broth 用于弯曲杆菌选择性增菌培养(Merck方法) 250
CCDA基础 进口、国产 CCDA Base 用于弯曲杆菌分离培养(WHO方法) 250
CCDA添加剂 进口、国产 CCDA Supplement 每支添加于200mlCCDA基础中 2ml*10支
Campy-Cefex 琼脂基础 进口、国产 Campy-Cefex Agar Base 用于弯曲杆菌分离培养(FDA方法) 250
Campy-Cefex 添加剂 进口、国产 Campy-Cefex Supplement 每支添加于200ml Campy-Cefex 琼脂基础中 2ml*10
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