本用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中肺炎病毒（PVM）表达。

实验原理

   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠肺炎病毒（PVM）表达。用纯化的大鼠肺炎病

毒（PVM）抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中肺炎病毒（PVM）相结合，经洗

涤除去未结合的抗体和其他成分后再与 HRP 标记的肺炎病毒（PVM）抗体结合，形成抗体

抗原 酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化

成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），

与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中大鼠肺炎病毒（PVM）的存在与否。

组成

 

  1  30 倍浓缩洗涤液

  2  酶标试剂

  3  酶标包被板

  4  样品稀释液

  5  显色剂 A 液

  6  显色剂 B 液

  标本要求

  20ml×1 瓶

  6ml×1 瓶

  12 孔×8 条

  6ml×1 瓶

  6ml×1 瓶

  6ml×1/瓶

  7  终止液

  8  阳性对照

  9  阴性对照

  10  说明书

  11  封板膜

  12  密封袋

  6ml×1 瓶

  0.5ml×1 瓶

  0.5ml×1 瓶

  1 份

  2 张

  1 个

 

  1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于20℃保存，但应避免反复冻融

  2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

  1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1

孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

   2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50!l。然后在待测样品孔先

加样品稀释液 40!l，然后再加待测样品 10!l。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不

触及孔壁，轻轻晃动混匀，

  3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

  4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

  5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干。

  6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50!l，空白孔除外。

  7. 温育：操作同 3。

  8. 洗涤：操作同 5。

  9. 显色：每孔先加入显色剂 A50!l，再加入显色剂 B50!l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

  10 分钟.

  10. 终止：每孔加终止液 50!l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

  11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

操作程

 

计算和结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00;  阴性对照平均值≤0.10 

临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15 

阴性判定：样品 OD 值<  临界值（CUT OFF）者为肺炎病毒（PVM）阴性

阳性判定：样品 OD 值≥  临界值（CUT OFF）者为肺炎病毒（PVM）阳性

。

注意事项

  1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

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