一.筛选

    诱变育种包括诱变和筛选两个过程，在诱变育种中突变是随机的，但筛选是定向的。筛选的条件决定选育的方向，因为突变体高产性能等优良特性总是在一定的培养条件下才能表现出来。培养基和培养条件是决定菌种某些特性保留或淘汰的筛子。

1.筛选方案

    在诱变育种中，为了提高筛选效率，往往将筛选工作分为初筛和复筛两步进行。初筛的目的是删去明确不符合要求的大部分菌株，把性状类似的菌株尽量保留下来，使优良菌种不至于漏网。因此，初筛工作以量为主，测定的性还在其次。初筛的手段应尽可能快速、简单。复筛的目的是确认符合要求的菌株，所以，复筛步骤以质为主，应测定每个菌株的指标。由于诱变产生高产突变株的频率很低，而且实验误差又在所难免·因此，在筛选工作中常采用多级水平筛选，有利于获得优良菌株。多级水平筛选的原则是让诱变后的微生物群体相继通过一系列的筛选．每级只选取一定百分比的变异株，使被筛选的菌株逐步浓缩。如在工作量限度为20O只摇瓶的具体条件下，为了取得zui大的效果，有人提出以下的筛选方案。

第三轮、第四轮……(操作同上)。

    初筛和复筛工作可以连续进行多轮，直到获得较好的菌株为止。采用这种筛选方案，不仅能以较少的工作量获得良好的效果，而且，还可使某些眼前产量虽不很高，但有发展前途的优良菌株不至于落选。

    通过以上筛选方案将挑选的菌落移种斜面培养后直接接入摇瓶培养，发酵产物采用常规法进行测定．这种筛选方法称为常规筛选法。

    为了进一步提高筛选效率，可以在常规筛选法基础上进行改进：一方面分离到平皿上的菌落采用琼脂块法进行预筛选；另一方面，初筛摇瓶发酵液中产物分析，采用简便、快速的琼脂平板测定法或其他简便方法。

2.筛选方法

    筛选方法可以分为随机筛选和平板菌落预筛选。随机筛选是指随机挑选平板菌落进行摇瓶筛选。平板菌落预筛选是根据特定代谢产物的特异性，在琼脂平板上设计一些巧妙的筛选方法和活性粗测方法用于诱变后从试样中检出突变株的一种琼脂平板筛选法。平板菌落预筛选主要采用以下几种方法。

(1)根据形态变异进行预筛选研究不同菌落形态与能力之间的关系，在进行摇瓶筛选前，先根据菌落形态进行一次预筛选，即淘汰低产菌落形态的菌落，挑取高产菌落形态的菌落接种斜面，进行摇瓶筛选。在根据菌落形态进行预筛选时要注意，往往一些不为人注意的微小变化却是高产的源头。

(2)根据平板菌落生化反应直接挑取突变株

①平板菌落直接选育法单孢子悬浮液经诱变后的存活孢子，经适当稀释后涂布于平板上培养，待平板菌落长好后喷射检定菌，再继续培养18h，以抑菌圈直径与菌落直径之比为指标进行筛选。

②采用指示剂筛选高产菌株 如产生菌的平板预筛法，常在培养基中加入溴百里酚蓝指示剂，培养后在蓝色平板菌落周围出现黄色，测定其直径大小，初步选出优良的突变株。

③采用冷敏感菌株筛选抗生素突变株 以冷敏感菌为检验菌，它在20℃下不生长，而放线菌能生长。因此，可将单孢子悬浮液经诱变后的存活孢子和冷敏感检验菌一起涂布于平板上，在20℃下培养，待菌落培养成熟后．再在37℃下培养18h左右，以抑菌圈直径与菌落直径之比为指标进行筛选。

④用于酶类产生菌的平板预筛法用于产生菌的平板预筛法：以淀粉为底物制成平板，诱变后的菌体涂布平板，菌落形成后，用碘液浸涂，根据菌落周围形成的无变色区大小决定取舍。

    蛋白酶产生菌的平板预筛法：以酪素为底物制成平板，诱变后的菌体涂布平板，根据菌落周围形成的透明圈大小决定取舍。

(3)浓度梯度法抗生素产生菌合成抗生素的能力与其对自身抗生素的抗性有关。一般来说，抗生素产生菌对自身抗生素的抗性越高，其能力也越高。筛选抗生素抗性突变株可用浓度梯度法，即在含抗生素的浓度梯度平板上筛选抗生素抗性菌株。浓度梯度平板的制备及平板上菌落生长情况。

(4)琼脂块法春雷霉素琼脂块预筛选法。选择一种既有利于菌体生长．又能满足产物形成的培养基制成平板，当菌落刚长出时，即用打孔器将菌落取出，转移到空白的无菌平板培养，培养成熟后再转移到检定平板(含敏感菌或底物)上，培养一定时间后，测量琼脂块周围形成的抑菌圈或水解圈大小。

    琼脂块法比一般直接分离在平皿上判断活性的反应圈要准确。所有菌落都在同一面积的琼脂块上，避免相互间的干扰。每个菌落的产物都在同一体积的琼脂块中，避免由于扩散不同而造成的误差。琼脂块法的zui大优点是可以大幅度增加筛选量。其不足之处是培养条件与发酵有很大差别，易造成漏选。

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